TP3 S Paration Des Prot Ines Par Lectrophor Se En Gel De Plyacrylamide

LENDORMY Emilie FRÉJAVILLE Marie Compte rendu Séparation des proté Polyacrylamide Groupe 32 21 5 en gel de Sni* to View M. SAINT PAUL But : L’électrophorèse a pour but de séparer des molécules chargées au travers d’un gel (un polymère) sous l’effet d’un champ électrique. Dans ce cas-Cl, il s’agira de séparer les protéines d’échantillons et de déterminer le poids moléculaire de ces différentes protéines. Principe .

Electrophoresis) qui permet de séparer des molécules de tailles plus petites comme des protéines et de la même façon que l’agarose, en augmentant la concentration de polyacrylamide n va pouvoir accroitre la résolution et donc la séparation des molécules plus petites. Comme le polyacrylamide a une forte affinité pour le verre, l’électrophorèse va se faire de façon verticale. Il existe différentes techniques d’électrophorèse qui emploient le gel de polyacrylamide. Ici on utilisera l’électrophorèse en présence de SDS-. Le SDS est un détergent ionique chargé négativement.

Son rôle est de dénaturer les protéines (passer de la structure quaternalre à la structure primaire). L’objectif est de casser toutes les liaisons qui permettent la mise en place de la structure secondaire, ertiaire et quaternaire. En se fixant, il confère à toutes les protéines une charge négative. La séparation ne s’effectue donc que selon la taille des molécules (les protéines les plus grosses sont ralenties par le polyacrylamide et les plus petites passeront au travers des mailles et migreront plus rapidement). On rajoute également du Bmercaptoéthanol qui va permettre la rupture des ponts disulfures.

De plus, pour obtenir une meilleure séparation des protéines, on va utiliser un gel de concentration (dont la concentration en acrylamide est inférieure) avant le gel de séparation PAG » OF d concentration (dont la concentration en acrylamide est inférieure) avant le gel de séparation ce qui va permettre de regrouper les protéines et faciliter leur séparation. une fois déposées dans les puits, les protéines vont migrer vers l’anode Après la migration, la révélation des protéines se fera à l’aide d’une solution spécifique : le bleu de Coomassie.

Pour déterminer leur poids moléculaire, nous utiliserons le marqueur BioLabs. Résultats : première molécule a migré à 0,2 cm, la deuxième à 0,3 cm, la troisième à 0,7 cm et la dernière à 2,3 cm. Par lecture graphique, il est ainsi possible de déterminer le poids moléculaire de chaque protéine contenue dans l’échantillon « Protéine A » (vert) et dans l’échantillon « Protéine B » (rose). Pour 4 protéines, les poids moléculaires peuvent être obtenus directement par lecture graphique en utilisant les valeurs du marqueur BioLabs.

Pour les autres, il faut passer par les puissances de 10. Distance de migration (cm) Poids moléculaire (Daltons) 0. 2 212. 103 0. 7 16. 103 2. 3 55,6. 103 4. 6 6. 2 200. 103 Conclusion : On remarque que les protéines contenues dans l’échantillon ? Protéine B » sont 2 à 4 fois plus petites que celles contenues dans l’échantillon « Protéine A Sur le gel, il est impossible de voir la bande caractéristique de l’Aprotinine, plus petite molécule du marqueur Biol_abs.

Deux raisons peuvent l’expliquer . une durée trop courte consacrée à la migration ce qui va limiter la bonne séparation des protéines une concentration trop faible en Pol acrylamide ce qui va empêcher la séparation de lus petites pour une concentration trop faible en Polyacrylamide ce qui va empêcher la séparation des protéines plus petites