Bactério

Compte —Rendu Bactériologie Préparé Date UPJV Culture par : Matar Rayan, Mayet Anaïs 10/04/15 numéro 6 or7 Sni* to View 1- Bouillon A6: Examen à l’état frais L’observation microscopique, grandissement 40 et luminosité moyenne, nous montre des bactéries de forme bacillaire dotée de mouvement (flagelles). Examen avec coloration de Gram: Après coloration de gramme, on observe au microscope, grandissement 100 et forte luminosité, des bacilles gram – (colorés en rose). Ce qui corrèle avec le résultat précédemment obtenu.

Isolement : A partir de l’échantillon, les bactéries sont ensemencés dans un ilieu de culture normal non bactérie, pour ce faire on prélève une petite colonie sur la BCP que l’on dépose sur un disque Ok On n’observe aucune coloration sur le disque, la bactérie est donc oxydase négative : on peut donc en conclure que c’est une Entérobactérie Api 20 E : A partir de l’étude de 21 caractères biochimiques (Le 21ème étant le test de l’oxydase) an cherche à déterminer l’espèce de l’entérobactérie mise en évidence dans l’étape précédente.

Des prélèvements de bacterles sont mis en suspension, puis en contact avec les différents micro-puits du test ; l’ensemble est placé à 37 oc pendant 24h

Réalisation de Fantibiogramme: Antibiotique Famille ables Spectre Résistance naturelle des entérobactéries Ampicilline Bêta—lactamines Paroi bactérienne PAG » rif 7 (Céphalosporine (Carbapénème) Imipénem Polymyxines (E) Colistine Ciprofloxacine Fluoroquinolone Gentamicine Aminocide (aminoglycoside) membrane Topo–isomérase de type Il (ADN— Sous unité 30S des ribosomes Non PAGF3C,F7 clavulanique Céfotaxime Imipénème Ciprofloxacine Conclusion : Diamètre S/I/R en mm donc soit un streptocoque soit un entérocoque.

Les deux ayants un aspect microscopique en chainettes en confirme l’observation initiale. Tests de distinction : Dans le but de déterminer la nature de la bactérie, on choisit deux milieux hostiles . Gélose B. E. A : riche en sel biliaire, permettant l’identification des streptocoques non hémolytiques Bouillon hypertonlque : riche en chlorure de sodum, permettant d’identifier les entérocoques, et ne permettant pas le développement des streptocoques de groupe D On réalise dans ce but une strie dans la gélose B.

E. A, et on met en suspension dans le BH un prélèvement de colonies bactériennes. Les deux seront incubés pendant 24h à 37 cc. 2,3. jour 3 : Résultat de la B. E. A • Résultat du BH : numero ontour frangé et un relief bombé. Les plus petites ont également un relief bombé Cette dernière ne sera pas exploltée dû à la superposition des colonies ; GSF : Isolement de bonne qualité : on observe nettement les 2 types de colonies présentant le même aspect (bombées et rondes).

Sur les plus grosses, on remarque un halo complet à bord net signifiant une hémolyse totale donc une bactérie bétahémolytique. Cette gélose sera sélectionnée dans le but de différencier les deux colonies, vue que ces dernières sont bien isolées. Chapman : Isolement de très bonne qualité, on observe le virage du rouge de hénol vers le jaune signifiant la fermentation du mannitol. On note la présence d’une seule colonie bactérienne de petite taille, ronde à contour régulier, ? relief bombé et à surface lisse.

Il s’agit d’un indicateur direct de la présence de staphylocoques dans le mélange. Coloration de Gram : Confirmation des résultats xtraite de la gélose de présence de Staphylocoques. En plongeant une pipette Pasteur contenant une colonie bactérienne (issu de la gélose de Chapman) dans 1 ml. d’eau oxygénée, on observe un dégagement gazeux (H202àOH20 + h 02). La bactérie est catalase + c’est donc bien un Staphylocoque. Recherche de la staphylocoagulase : On détermine l’espèce du Staphylocoques mis en évidence dans le mélange.

Ce test repose sur le mélange de 0,5ml de bouillon avec une colonie. L’ensemble est mis à l’étuve pendant 1h puis on ajoute du plasma de lapin oxalaté. C] On incube 24 heures ? src. La présence d’un coagulum au fond du tube (coagulase+) indique la présence d’un Staphylococcus aureus, dans le cas contraire on aura un Staphylococcus spp. (Coagulase milieu liquide) Réalisation de l’antibiogramme: Amoxicilline+ acide clavulanique Ticarcilline Ceftazidine Gentamiclne Résistance naturelle oui Oui du Pseudomonas aeruglnosa