Tp97 Sujet21
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TECHNOLOGIES BIOCHIMIQUES ET BIOLOGIQUES p Npp + H20 — TRAVAUX PRATIQUES SUJET 21 Durée : 7 heures BIOCHIMIE (8 points) Coefficient : 9 Durée : 3 heures DETERMINATION D KM et Vmax D’UNE ENZYME PACE 1 Sni* to View ES L’enzyme étudiée est la phosphatase alcaline. On utilise la cinétique d’hydrolyse du PNPP (paranitrophényl phosphate) à 300C et à pH = 9,8. C] PNP + phosphate Le PNP (paranitrophénol) jaune en milieu alcalin est dosé par photométrie d’absorption moléculaire à 405 nm. I . GAMME ETALON DE PARANITROPHENOL On dispose d’une solution de PNP à mmol. L-1
Préparer une gamme d’étalonnage dans les tubes à essais, selon chaque tube, par addition rapide et homogénéisation immédiate de 1 mL de solution d’hydroxyde de sodium à 2,5 mol. L-1 Eau distillée (en mL) 4 Lire les absorbances à 405 nm contre un blanc de composition suivante : 4 mL de tampon pH = 1 mL de solution de phosphatase alcaline 1 ml_ de solution d’hydroxyde de sodium à 2,5 mol. L-1 4 mL d’eau distillée 3. RESULTATS Compléter la fiche de résultats. FEUILLE A RENDRE AVEC LA COPIE FEUILLE DE RÉSULTATS 1. GAMME ETALON DE PNP 1 . 1. Compléter le tableau Tube ne 2